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不同培養(yǎng)基的體積對抑菌圈的影響大
更新時間:2018-12-11   點擊次數(shù):3171次
       不同體積培養(yǎng)基對抑菌圈大小有一定影響,抑菌圈會隨培養(yǎng)基體積的增加而變小,培養(yǎng)基體積15 mL時為佳值。試驗人員應(yīng)注重量化培養(yǎng)基的量以減少試驗誤差。為了判斷這一結(jié)論的準(zhǔn)確性,我們可以通過一下的試驗來進(jìn)行鑒定。本試驗正是通過制備不同體積的培養(yǎng)基來觀察其對抑菌圈的影響。
  1.試驗儀器及材料
  試驗儀器:二級生物安全柜,生化培養(yǎng)箱,高壓滅菌鍋,恒溫水平搖床,移液槍。
  標(biāo)準(zhǔn)菌株:ATCC6538金黃色葡萄球菌,8099大腸桿菌。
  試樣:1.5 cm×1.5 cm規(guī)格,滅菌處理。
  平板計數(shù)瓊脂,PBS緩沖液。
  2.試驗方法
 ?。?)接種液準(zhǔn)備:按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,用PBS緩沖液稀釋細(xì)菌懸液至1×106cfu/mL~5×106cfu/mL。
 ?。?)培養(yǎng)基準(zhǔn)備:分別用移液槍制備10 mL、15mL、20 mL、25 mL四個不同體積的培養(yǎng)基各6個(3個用于ATCC6538金黃色葡萄球菌,另3個用于8099大腸桿菌)。
 ?。?)試樣接種:用無菌棉拭子蘸取接種菌液,在平皿的培養(yǎng)基表面均勻涂抹3次,每涂抹1次,平皿轉(zhuǎn)動60°,后將棉拭子繞平皿邊緣涂抹一周,蓋上蓋子,置室溫干燥5 min。
 ?。?)貼試樣:將試樣平貼在培養(yǎng)基上,用無菌鑷子輕壓試樣,使其緊貼培養(yǎng)基表面。每個培養(yǎng)基貼一塊試樣于中間位置。
 ?。?)培養(yǎng):倒置平皿,放入生化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16h~18 h。
  (6)測量:測出每個平皿中的抑菌圈外沿總寬度及試樣總寬度,進(jìn)而算出抑菌圈寬度,求出平均值。
  從試驗結(jié)果可看出,不同體積的培養(yǎng)基對抑菌圈的影響還是比較大的。培養(yǎng)基體積為10 mL和15 mL時,抑菌圈相差不大,但當(dāng)培養(yǎng)基增加到20 mL時,抑菌圈驟降,下降率超過20%。總體來說,隨著培養(yǎng)基體積的增加,厚度也增高,但抑菌圈卻反而變小。原因可能是體積增大,越多的抗菌劑滲透到了培養(yǎng)基底層,從而影響了表面的抑菌圈大小。
  3.結(jié)論
  由以上試驗可以看出掌控培養(yǎng)基的體積是準(zhǔn)確測量抑菌圈的一個關(guān)鍵點。以15 mL為準(zhǔn),10mL~15mL都是合適的。培養(yǎng)基太少不能覆蓋平皿底部,多于15mL會使結(jié)果低于實際值而把不合格樣品誤判成合格品。因此,在試驗時,應(yīng)準(zhǔn)確量化培養(yǎng)基的量,可采用移液槍或量筒來定量,而不能光靠經(jīng)驗和感覺來定量培養(yǎng)基體積。

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