不同體積培養(yǎng)基對抑菌圈大小有一定影響，抑菌圈會隨培養(yǎng)基體積的增加而變小，培養(yǎng)基體積15 mL時(shí)為佳值。試驗(yàn)人員應(yīng)注重量化培養(yǎng)基的量以減少試驗(yàn)誤差。為了判斷這一結(jié)論的準(zhǔn)確性，我們可以通過一下的試驗(yàn)來進(jìn)行鑒定。本試驗(yàn)正是通過制備不同體積的培養(yǎng)基來觀察其對抑菌圈的影響。
　　1.試驗(yàn)儀器及材料
　　試驗(yàn)儀器：二級生物安全柜，生化培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋，恒溫水平搖床，移液槍。
　　標(biāo)準(zhǔn)菌株：ATCC6538金黃色葡萄球菌，8099大腸桿菌。
　　試樣：1.5 cm×1.5 cm規(guī)格，滅菌處理。
　　平板計(jì)數(shù)瓊脂，PBS緩沖液。
　　2.試驗(yàn)方法
　?。?）接種液準(zhǔn)備：按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，用PBS緩沖液稀釋細(xì)菌懸液至1×106cfu/mL～5×106cfu/mL。
　　（2）培養(yǎng)基準(zhǔn)備：分別用移液槍制備10 mL、15mL、20 mL、25 mL四個(gè)不同體積的培養(yǎng)基各6個(gè)（3個(gè)用于ATCC6538金黃色葡萄球菌，另3個(gè)用于8099大腸桿菌）。
　?。?）試樣接種：用無菌棉拭子蘸取接種菌液，在平皿的培養(yǎng)基表面均勻涂抹3次，每涂抹1次，平皿轉(zhuǎn)動(dòng)60°，后將棉拭子繞平皿邊緣涂抹一周，蓋上蓋子，置室溫干燥5 min。
　?。?）貼試樣：將試樣平貼在培養(yǎng)基上，用無菌鑷子輕壓試樣，使其緊貼培養(yǎng)基表面。每個(gè)培養(yǎng)基貼一塊試樣于中間位置。
　?。?）培養(yǎng)：倒置平皿，放入生化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)16h～18 h。
　?。?）測量：測出每個(gè)平皿中的抑菌圈外沿總寬度及試樣總寬度，進(jìn)而算出抑菌圈寬度，求出平均值。
　　從試驗(yàn)結(jié)果可看出，不同體積的培養(yǎng)基對抑菌圈的影響還是比較大的。培養(yǎng)基體積為10 mL和15 mL時(shí)，抑菌圈相差不大，但當(dāng)培養(yǎng)基增加到20 mL時(shí)，抑菌圈驟降，下降率超過20%?？傮w來說，隨著培養(yǎng)基體積的增加，厚度也增高，但抑菌圈卻反而變小。原因可能是體積增大，越多的抗菌劑滲透到了培養(yǎng)基底層，從而影響了表面的抑菌圈大小。
　　3.結(jié)論
　　由以上試驗(yàn)可以看出掌控培養(yǎng)基的體積是準(zhǔn)確測量抑菌圈的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。以15 mL為準(zhǔn)，10mL~15mL都是合適的。培養(yǎng)基太少不能覆蓋平皿底部，多于15mL會使結(jié)果低于實(shí)際值而把不合格樣品誤判成合格品。因此，在試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)確量化培養(yǎng)基的量，可采用移液槍或量筒來定量，而不能光靠經(jīng)驗(yàn)和感覺來定量培養(yǎng)基體積。